详解奥林巴斯显微镜割断法的观察要点
如果奥林巴斯显微镜样品以苯乙烯树脂做为包埋剂,再行割断法做扫描电镜观察是十分方便的。因为苯乙烯聚合后,氧化丙烯及醋酸异戊酸等很容易将其溶解,多次更换溶剂便可将苯乙烯清除干净.因此,在制做透射电镜标本时,多做出几个包埋胶囊样品,待聚合后,显微镜按上述方法割断,奥林巴斯显微镜将割断好的样品放在氧化丙烯中,约2小时后便可经醋酸异戊醋置换、临界点干操。
奥林巴斯显微镜除树脂割断法外,尚有有机溶剂(酒精、醋酸异戊醋等)割断法,显微镜水溶性包埋剂(二甲基亚矾、甘油等)割断法及其它(冷冻、奴里昂等)割断法,操作都很容易。再以酒精割断法为例:样品固定后用酒精脱水。当脱水完成后,显微镜将样品投入顶先装有无水乙醉的胶囊中(避免出现气泡)。显微镜将胶囊放在低温装里内使乙醉固化.进行样品割断。割断的样品立即进入置于室温的无水乙醉中,待乙醉融化后移入醋酸异戊酷、进行临界点干操。
需指出的是经割断法制备的标本需要用高分辨率的显微镜(如场发射电子枪扫描电镜)进行观察.一般的扫描电镜分辨率低于透射电镜,若用显微镜镜割断法观察组织、细胞的内部结构,以和透射电镜图相对比,必须用场发射电子枪扫描电镜.由于显微镜立体感较强,割断样品在镜下显现出高尔基扁平囊与大泡、小泡的空间分布,线粒体蜡像隔板一样伸展;核搪体像小蘑菇一样附着在内质网“板”上,该方法应用不太广泛。