肾小球分离、移植培养

SD 大鼠颈椎脱臼法处死，75%乙醇浸泡 1～2 分钟，2 次，置超净台内，打开腹腔取出肾脏剪碎，置含 Hank's 液的无菌培养皿洗涤，置 80 目不锈钢筛网上。

用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小组织透过筛网，滤过组织 Hank's 液混合物用吸管吸至120目不锈钢筛网，滤过，去小组织块，滤过物吸至200目不锈钢筛网，轻轻滤过， Hank's液洗涤 次， 收集网上肾小球， 镜下观察为分离良好的肾小球。肾小球用 0.2%胰酶、0.1%胶原酶，37℃消化20 分钟，加血清终止胰酶反应，离心除去胶原酶。处理过的肾小球计数后接种至24孔培养板或25ml培养瓶，使肾小球大于60个/cm2，加培养基5～10ml（培养基组成：F12—3T3 上清 1：1；5% 马血清；2.5%胎牛血清；胰岛素 5μg/ml；25ng/ml 氢化松；5μg/ml转铁蛋白；25ng/ml 前列腺素 E1；甲状腺素 0.02ng/ml；D-缬氨酸 150ng/ml）肾小球培养 8～10 天，去除肾小球未生长组分，细胞继续培养 24 小时，形态学观察：细胞生长成单层多角型细胞，直径约 100μm。