Biozellen植物源基质胶在内皮细胞血管生成实验的操作应用

内皮细胞血管生成实验步骤

A、试验材料准备:

1、内皮细胞:脐带内皮细胞(实验使用细胞代数需低于五代)

2、内皮细胞专用培养液(含内皮生长所需因子): 自己配置 or 采购市售专用内皮细胞培养液 (如购自Lonza或者Promocell等品牌)

3、生长因子:VEGF,Heparin等(如购自Sigma)

B、胶体制备试剂准备:

1、A胶(1X)制备:将 A胶 (2X) 置于37℃水浴槽回温10分钟，确认完全溶解。A胶(2X)与含有生长因子(例如VEGF等)的内皮细胞专用培养液，按照1:1比例混合均匀。(例如:将37℃水浴回温的内皮细胞专用培养液取 0.5mL，直接加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A胶 (2X)，配置成 1 mL 的 A胶 (1X)。使用前置于37 ℃，可降低黏度。建议单次使用，勿重复冷冻解冻 A胶 (1X) )

2、A胶 (0.5X) 制备:将上述步骤1的 A胶 (1X)与含有生长因子的内皮细胞专用培养液，按照1:1比例混合均匀。

3、C缓冲溶液 (5 X) 制备 : C缓冲溶液 (10 X) 与预冷的含有生长因子的内皮细胞专用培养液，按照 1:1 比例混合均匀。(例如 : 0.5 mL C缓冲溶液 (10 X) + 0.5 mL 含有生长因子的内皮细胞专用培养液)

C、内皮小管生成实验准备程序:

1、将 96 孔细胞培养板放置于冰上。

2、加入 50 μl A胶 (0.5X) 平铺到96孔细胞培养板内。

3、将步骤 2 的培养板置于冰上 10 分钟。

4、加入 100 μl 冰的C缓冲溶液(5 X)，盖过步骤3的A胶，在冰上反应15分钟.(C缓冲溶液用于A胶凝胶反应)

5、待反应15分钟后，小心的吸出 C 缓冲溶液。

6、加入100μl含有生长因子5 μg/ml VEGF及0.25 mM Heparin之内皮细胞悬浮液，使每孔细胞数目为2.5x10^4 cells/well (细胞浓度为2.5 x 105 cells/mL)。

6.1、(注):建议添加VEGF及Heparin方式如下，取1 mL细胞浓度2.5 x 105 cells/mL的内皮细胞悬浮液进行离心，并收集细胞沉淀。 细胞沉淀物先与0.125 mL的40 μg/ml VEGF及0.125 mL，2 mM Heparin 进行混合5-10分钟。最后再加入0.75 mL细胞培养液，使VEGF最终浓度为5 μg/ml、Heparin最终浓度为0.25 mM及细胞浓度为2.5 x 105 cells/mL。

7、将细胞培养板在37 ℃, 5 % CO2培养箱培养12小时内完成。(建议内皮细胞观察时间为6-8小时)

在内皮细胞血管生成实验的应用编辑

在内皮细胞血管生成实验中所用到的基质胶产品信息：

美国Biozellen植物源基质胶（货号B-P-00002系列）编辑

产品描述 ：Biozellen®3D细胞培养基质胶套装包含整套基质胶、胶体固定液、胶体溶解液，可应用到 3D 细胞培养与微环境应用等；本试剂盒操作便利且可调控基质胶硬度进行多种细胞培养测试等；胶体可快速被固定液分解。（Biozellen®3D细胞培养基质胶套装为植物来源，无动物源成分、不含酚红）

货号： B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

规格： 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

保存条件：4℃保存、 保存两年

安培生物科技有限公司是美国Biozellen公司的中国代理商。Biozellen®3D细胞/类器官培养基质胶现货供应，经验证可完全替代BD/康宁的基质胶，来源为植物源且氨基酸序列人源化，无人畜共患病的病原菌或毒素污染，提供完整售后服务和技术支持。

安培生物科技有限公司（Biozellen中国代理商）

致力成为推动生命科学进步和值得信赖的合作者