【预期用途】

仅供科研使用，本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中蛋白磷酸化酶2A（PP2A）活性。

【检测原理】

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人蛋白磷酸化酶2A（PP2A）水平。用纯化的人蛋白磷酸化酶2A（PP2A）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入蛋白磷酸化酶2A（PP2A），再与HRP标记的蛋白磷酸化酶2A（PP2A）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白磷酸化酶2A（PP2A）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人蛋白磷酸化酶2A（PP2A）活性浓度。

【产品性能】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气(如有漏气，不影响使用）。

2、剂量反应曲线线性

标准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。

3、检测范围

1.2U/L -45U/L。

4、灵敏度

检出剂量不能小于0.3U/L 。

5、精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV 表示。CV（%） = SD/mean×100

批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD 值。

批间差：选取3 个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定10 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD 值。

批内差： CV<5.9%

批间差： CV<8.1%

6、回收率

分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。

Sample TypeRange (%)Average Recovery (%)

Tissue Lysates (n=5)93-10298

Serum (n=5)91-10499

EDTA plasma (n=5)95-109105

Cell culture media (n=5)87-110101

7、线性

分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。

Sample1:21：41:81:16

Tissue Lysates (n=5)92-105%84-95%90-102%81-93%

Serum (n=5)81-103%81-99%86-98%83-101%

EDTA plasma (n=5)85-97%82-101%85-96%79-91%

Cell culture media (n=5)83-105%89-112%81-106%82-110%

8、特异性

本试剂盒识别天然和重组 人蛋白磷酸化酶2A（PP2A），经检测与其它相似物质无明显交叉反应。由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

9、稳定性

经测定，试剂盒在有效期内务必按推荐温度保存，活性降低率小于5%。为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

操作步骤】

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

8.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10-20分钟。

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。